名称：pENTR™/SD/D-TOPO® Cloning Kit with One Shot® TOP10 Chemically Competent E. coli货号：K242020规格：20 reactions价格：4540插入Gateway®系统，只需扩增您的目标基因，之后将PCR产物直接加入到试剂盒中提供的具有拓扑异构酶活性的pENTR™⁄D-TOPO®载体中，孵育5分钟，然后转化试剂盒中提供的感受态 大肠杆菌 细胞。得到的含有Gateway®的插入克隆就可以高效地与Gateway®目标载体进行重组。pENTR™⁄D-TOPO®载体(图1)包括M13和T7引物测序位点，以及PCR产物插入位点侧翼的attL重组位点。这使得克隆的测序验证以及与您选择的含attR Gateway®目标载体进行重组变得简单。卡那霉素抗性基因以及pUC启动子可用于筛选和在大肠杆菌中进行高拷贝扩增。使用TOPO®定向克隆技术，您不再需要PCR纯化，载体制备，或者其他耗时的DNA操作步骤。只需要直接将您的PCR反应产物加入到提供的含拓扑异构酶的载体中，孵育5分钟，然后进行转化，就可获得90%以上正确插入的克隆。载体中的4个碱基，与您在PCR反应中使用的正向引物中预先设计的4个碱基进行配对，保证了拓扑异构酶催化的连接反应的定向性(图2)。Gateway®重组克隆技术克服了限制性酶催化克隆的局限性，使您能在短短1个小时内将产物插入任何表达系统中，效率高达99%，而且Gateway® 重组反应。Invitrogen 的pENTR™⁄SD⁄D-TOPO®克隆试剂盒采用高效的5分钟克隆策略("TOPO®克隆") ，能够将平端PCR产物能以定向插入Gateway® 系统或者多位点Gateway® 系统，平端PCR克隆产物的定向插入pENTR™⁄SD⁄D-TOPO® 载体的效率超过90%，而且包含Shine-Dalgarno上游序列，用于原核系统中的表达。这一试剂盒包括了筛选PCR目标扩增基因所需的一切试剂。