Trizol Reagent
简介:TRIzol是一种新型总RNA抽提试剂，可以直接从细胞或组织中提取总RNA。其含有苯酚、异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶。
TRIzol在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性，因此对纯化DNA及标准化RNA的生产十分有用。
TRIzol的成分:
TRIzol的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase(RNA酶)。
※0.1%的8－羟基喹啉可以抑制RNase，与氯仿联合使用可增强抑制作用。
※异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质并使蛋白质二级结构消失，导致细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。
※β-巯基乙醇的主要作用是破坏RNase蛋白质中的二硫键。
TRIzol的使用方法:
用匀浆器将组织磨碎，加入TRIzol处理组织。5分钟后加入氯仿，以每分钟12000转离心5分钟，样品即分成水样层、中间层和有机层。
※RNA存在于水样层中，收集水样层后可以通过异丙醇沉淀RNA来还原。
※在除去水样层后，有机层中的DNA和蛋白质也能相继以沉淀的方式还原：乙醇能使中间层的DNA沉淀析出，在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白质。
每100ml TRIzol可以抽提100个六孔板中的样品或100个50-80mg的组织样品。无论样品是人、动物、植物还是细菌组织，该方法对少量的组织(50-100mg)和细胞(约五百万个)及大量的组织(≥1g)和细胞(超过一千万个)均有较好的分离效果。
每一百万细胞用TRIzol抽提可得5-15微克RNA，每毫克组织用TRIzol抽提可得1-10微克RNA(产量因细胞和组织不同而异)。
TRIzol操作上的简便性允许其同时处理多个样品，所有的操作可以在一小时内完成。
TRIzol抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白质的污染，故而能够作RNA 印迹分析、斑点杂交、poly(A)+ 选择、体外翻译、RNA酶保护分析和单分子克隆(PCR)。
※如果是用于PCR，当两条引物位于单一外显子内时，建议用级联扩大的DNase I(Cat. No. 18068)来处理抽提的总RNA。
※TRIzol试剂能促进不同种属、不同分子量大小的多种RNA的析出。例如，从大鼠肝脏抽提的RNA经过琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色，可见许多介于7kb和15kb之间的不连续的高分子量条带(mRNA和hnRNA成分)，两条优势核糖体RNA条带位于~5 kb (28S)和~2 kb (18S)，低分子量RNA介于0.1和0.3kb之间 (tRNA, 5S)。当抽提的RNA用TE稀释时，其A260/A280比值≥1.8。抽提小RNA时宜-70℃沉淀过夜。
TRIzol对人体有害，使用时应戴